제품 설명
TEV Protease는 Tobacco Etch Virus의 TEV Protease를 코딩하는 유전자를 E. coli에서 발현하여 정제한 재조합 단백질입니다. 이 효소는 7개의 아미노산 서열인 Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser 또는 그 변이체를 특이적으로 인식하여, Gln과 Gly/Ser 사이의 마지막 펩타이드 결합을 절단합니다. 앞의 서열을 Maltose-binding protein(MBP) 및 poly-histidine과 같은 친화크로마토그래피용 tag 과 target 단백질 사이에 삽입하면, TEV Protease를 사용하여 단백질 정제 과정에서 tag를 제거할 수 있습니다. 이 제품은 넓은 범위의 온도와 pH 에서 활성을 나타내지만, 최적의 조건은 기질에 따라 다를 수 있으며 실험을 통해 결정해야 합니다.
제품 특징
- Molecular weight: 28.4 kDa
- Reaction temperature: 4-30℃
- Wide pH range: pH 5.5-8.5 (optimal pH=7)
제품 응용
- Removal of fusion tag from recombinant proteins
제품 구성품
- TEV Protease
- 10X TEV Protease buffer
- Sterile water
품질 관리
- Purity : >95% on SDS-PAGE
- Non-specific protease-free
- Endonuclease-free
- Exonuclease-free
- RNase-free
Unit 정의
One unit of TEV Protease is the amount of enzyme required to cleave >85% of 3 μg of substrate protein in 1 hr at 30℃ in the 1X TEV Protease buffer.
Storage buffer
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% TritonX-100, 50% glycerol
10X TEV Protease buffer
500 mM Tris-HCl (pH 8.0), 5 mM EDTA, 1 mM DTT
주의 사항
- 효소의 활성은 사용한 기질의 유형, 반응 온도, 반응 시간, 그리고 첨가한 TEV Protease 의 양에 따라 달라질 수 있습니다. 따라서, 각각의 기질에 따라 TEV Protease 의 절단 효율을 사전에 확인해야 합니다. 특정 기질들의 경우, 절단 지점의 존재하여도 절단 지점에 효소가 접근할 수 없으면 절단되지 않을 수 있습니다. 이는 polyglycine, polyhistidine, 혹은 TEV Protease 절단 지점 바로 옆에 있는 FLAG-tag epitope로 해결할 수 있으며, 이는 인식 아미노산 서열이 TEV Protease 에게 노출되게 합니다.
- 절단 반응 후, TEV Protease는 N-말단의 polyhistidine tag 은 Ni
2+-affinity column 으로 효과적으로 제거할 수 있습니다. Ni
2+-affinity column 사용 전 EDTA와 DTT는 미리 제거되어야 하는데, 10 mM 농도의 Mg2+ 로 EDTA를 중화할 수 있습니다. 일반적으로, affinity resin에 붙은 단백질은 수용액 상에서의 단백질보다 더 많은 양의 TEV Protease 를 요구합니다.
