제품 설명
EZchange Multi Site-directed Mutagenesis Kit는 plasmid 증폭, DpnI 처리, 형질전환의 3 단계 과정을 통해 DNA의 여러 위치에 동시에 변이를 생성할 수 있는 제품입니다. 1 단계에서는 여러 개의 mutagenic primer를 이용하여 template plasmid를 바탕으로 DNA를 합성한 다음, DNA ligase로 합성된 DNA 가닥들을 서로 연결하여 변이가 도입된 원형의 plasmid DNA를 생성합니다. 이과 같은 복제 사이클을 30번 정도 반복하여 변이가 도입된 단일가닥 DNA의 양을 증폭시킵니다. 2단계에서는 template plasmid를 DpnI으로 분해하고, 마지막 3단계에서는 대장균 형질전환을 통해 단일가닥 변이 DNA를 이중가닥 변이 DNA으로 변환합니다. 간단하고 빠른 반응으로 높은 효율 (>50%)로 다중변이 도입을 할 수 있습니다. 본 제품 중 Core Kit는 DH5α Chemically Competent E. coli가 포함되어 있지 않습니다.
제품 구성품
- EZchange Multi Enzyme mixture
- EZchange Multi 10X Reaction buffer
- dNTP mixture (2 mM each)
- EZchange Multi Control plasmid (50 ng/μl)
- EZchange Multi Control primer mixture
- Dpn I restriction endonuclease (20 units/μl)
- DH5α chemically competent E. coli
- SOC media
- pUC19 control plasmid (50 pg/μl)
- Sterile water
추가로 필요한 구성
- X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside)
- IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)
제품 보관
- 10X reaction buffer, DH5α competent cell: -80℃
- All other component: -20℃
주의 사항
- Avoid defrost cycle of reaction buffer and dNTP mixture. We recommend to make small aliquots, each for a single use.
- Template plasmids should be purified from dam+ E. coli strains Plasmid DNA isolated from the exceptional dam- E.coli strains, including JM110 and SCS110 is not suitable, since they are not digested by Dpn I.
