nTaq (Mg2+Plus)

제품명	Cat. No.	크기	농도	가격(원)	추가
nTaq (Mg2+ Plus)	P025A	250 unit	5 unit/μl	60,000
nTaq (Mg2+ Plus)	P050A	500 unit	5 unit/μl	108,000

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상품간략정보 및 구매기능

nTaq (Mg2+ Plus)

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제조사	P050A
원산지	500 unit
브랜드	5 unit/μl
판매가격	108,000원
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nTaq (Mg2+ Plus)

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제품 설명

nTaq (Mg2+Plus)은 Thermus aquaticus DNA polymerase I 을 E. coli 에서 발현한 재조합 단백질입니다.

Taq DNA polymerase는 열 안정성과 5’→3’ exonuclease 활성을 보이지만 3’→5’ exonuclease의 활성은 약합니다. nTaq은 Taq DNA polymerase의 개량형으로 N-terminal domain을 수정하여 5’→3’ exonuclease 활성 감소와 high-GC 및 DNA 2차 구조에서 증폭 효율을 증가시켰습니다.

제품 특징

- Molecular weight: 94 kDa

- Error rate: 2.4 × 10^-5

- Thermal stability: half-life of 40 min at 95℃

- A-tail formation at 3’ ends of amplified duplex DNA

제품 응용

- Amplification of DNA fragments shorter than 3 kb (suitable for general PCR applications)

- Genomic DNA or cDNA template

- Primer extension

- Colony PCR

- Radioactive labeling of DNA

- Nucleotide sequencing

제품 구성품

- nTaq

- 10X nTaq buffer (Mg²⁺ plus)

- dNTP Mixture (2 mM each)

- Sterile water

Unit의 정의

One unit is defined as the amount of enzyme required to incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble materials in 30 min at 74℃ in a 50-μl reaction mixture (20 mM Tris-HCl/pH 8.8, 50 mM KCl, 2.5 mM MgCl2, 10 mM β-mercaptoethanol, 12.5 μg of calf thymus DNA).

10X nTaq Buffer

Mg²⁺ plus buffer: containing 15 mM MgCl₂

Figure 1. Amplification of various human DNA fragments with nTaq DNA polymerase.

20 different DNA fragments were amplified with nTaq DNA polymerase (Cat. P025 or P050). Target DNAs with varying lengths were amplified by the use of following PCR cycles; 95℃ 2 min, (95℃ 30 sec, 55℃ 30 sec, 72℃ 1 min) x 30, 72℃ 5 min.

Lane 1~20, 120bp~ 1Kb; M, 1 kb (+) Ladder Marker (Cat. DM003)

Certificates of analysis

Manual

[ PDF ] P025A_nTaq (Mg2+ plus)_Manual

Material Safety Data Sheet

원하지 않는 PCR 산물이 나와요.

비특이적인 PCR 산물이 발생하면 아래 사항을 참조하십시오.
- 비특이 결합을 피하기 위해 더 긴 primer 를 사용하고 3' 말단에서 3개의 연속적인 G 또는 C nucleotides 를 피하세요.
- 특이성을 높이기 위해 annealing 온도를 높이세요.
- Mg²⁺농도를 낮춰서 사용해보세요.
- UDG 를 사용하여 교차 오염을 피하세요. 당사는 UDG가 포함된 PCR 제품들을 제공합니다.
PCR 산물이 너무 적어요

PCR 산물의 양을 늘리려면 아래 사항을 참조하십시오.
- Polymerase 사용량이 부족하거나 또는 PCR 반응액에 저해제가 존재할 수 있습니다.
- Hot-start 제품의 경우 initial denaturation 시간이 충분하지 않으면 PCR 중합효소가 100% 활성화 되지 않을 수 있습니다.
- Denaturation 및 extension 온도가 너무 높아서 polymerase 활성이 조기에 끝날 수 있습니다.
- Pimer가 잘못 설계되었거나 annealing 온도가 잘못 설정되었을 수 있습니다.
- 원하는 산물의 크기에 비해 짧은 extension 시간을 설정했을 수 있습니다.
- PCR cycle이 너무 적을 수 있습니다
- Mg²⁺가 부족하거나 너무 많습니다
- 너무 많은 DMSO가 포함되어 있을 수 있습니다.
PCR 이후 밴드가 보이지 않아요

- Denaturation 이 불완전할 수 있습니다. 높은 온도에서 충분한 시간동안 반응하십시오.
- Annealing 온도가 잘못 설정되었을 수 있습니다. Primer 의 Tm 을 확인하여 적절한 온도를 설정하십시오.
- Template 의 GC 비율이 높을 수 있습니다. 당사의 nTaq-Tenuto, nTaq-HOT, RbTaq Tenuto HOT, RbTaq HOT 에 포함된 GC Melt 를 사용하십시오.
- 반응액에 Taq DNA 중합효소의 저해제가 존재할 수도 있습니다. PCR에 BSA를 추가하거나, Taq의 양을 늘리거나, PCR 반응액의 부피를 늘려 저해제를 희석하십시오.
- GC 함량이 높은 template을 층폭할 경우 DMSO를 첨가해 볼 수 있으나 10% 이상 고농도의 DMSO는 Taq의 반응을 억제할 수 있습니다.
PCR 이후 번짐이 보여요

PCR 이후 전기영동에서 번짐현상은 아래와 같은 이유로 발생할 수 있습니다.
- PCR cycle을 너무 많이 진행했을 수 있습니다.
- 사용 중인 pimer 에 비해 annealing 온도가 낮을 수 있습니다.
- Annealing 또는 extension 시간이 너무 길었을 수 있습니다.
- primer가 오염되거나 오래됐을 수 있습니다.
- 너무 많은 template가 사용되었을 수 있습니다.
- Polymerase, primer, Mg²⁺ 및/또는 dNTP 농도가 너무 높을 수 있습니다.
GC 함량이 높거나 hairpin-loop 구조를 포함하는 template를 효과적으로 증폭시키려면 어떻게 해야 하나요?

보통 target DNA 의 GC 함량이 65% 이상일 때 GC-rich 하다고 볼 수 있습니다. GC-rich 영역은 inverted repeat 에 존재하거나 hairpin 구조를 형성하는 경향이 있어, denaturation 후 annealing 과정에서 단일가닥으로 분해된 주형 DNA의 base-paring으로 인해 2차구조가 형성될 수 있습니다. 이러한 2차구조에 의해 polymerase의 합성이 중간에 멈춰 불완전한 형태의 증폭 산물이 발생하게 됩니다. GC rich PCR 의 경우, 당사의 nTaq-Tenuto, nTaq-HOT, RbTaq Tenuto HOT, RbTaq HOT 에 포함된 GC Melt 를 사용하면 도움이 될 수 있습니다. 동봉된 GC Melt I, II 를 각각 전체 반응액의 1/5, 1/10, 1/20 정도 첨가하여 개선된 결과를 확인하시기 바랍니다.
길이가 긴 타겟을 증폭할 때 중요한 조건은 무엇인가요?

긴 PCR target를 효율적으로 증폭하기 위해서는 annealing 시간, 효소 반응액의 pH, 염 농도, primer design, DNA 샘플의 순도, 효소의 증폭 효율 및 proofreading 여부 등 여러 변수를 고려하여야 합니다.
DNA 정제과정에서 DNA 가 분해되거나 높은 온도와 낮은 pH 조건에서 DNA depurination 등이 일어나 DNA가 손상될 경우, 원래의 길이보다 짧은 DNA 단편의 증폭률이 늘어나며 전체 증폭 산물을 감소시킵니다.
효소의 증폭 효율도 주요한 조건이며, 당사는 긴 타겟의 증폭도 가능한 nTaq-Tenuto, RbTaq-Tenuto Hot, nPfu-Forte, nPfu-Special 등을 제공하고 있습니다.
Taq polymerase 에서 Mg2+의 역할은 무엇인가요?

Mg²⁺은 Taq DNA polymerase의 cofactor로 작용하며 효율적인 DNA 증폭에 매우 중요한 요소입니다. Mg²⁺ 농도가 낮으면 PCR 효소의 활성이 감소할 수 있으며, 반대로 농도가 높으면 효소의 정확성이 감소하여 비특이적인 DNA가 증폭될 수 있습니다. 샘플에 포함된 EDTA 또는 구연산염, 주형 DNA의 농도, dNTP 농도와 단백질 유무 등 다양한 요소가 Mg²⁺농도에 영향을 줄 수 있으므로 반응에 최적인 Mg²⁺ 농도를 찾아야 합니다. 당사의 nTaq (Mg2+ Free) (Cat. P025B) 과 nTaq-Tenuto (Mg2+ Free) (Cat. P225B) 는 25 mM MgCl₂ 를 별도로 제공하여, Mg²⁺ 농도를 조정할 수 있습니다.
㈜엔지노믹스 PCR Polymerase 제품 선택 가이드 라인

Characteristics of Enzynomics PCR polymerases

Selection guide of Enzynomics PCR polymerases

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