nTaq-Pure HOT

제품명	Cat. No.	크기	농도	가격(원)	추가
nTaq-Pure HOT	P725P	250 unit	5 unit/μl	82,000
nTaq-Pure HOT	P750P	500 unit	5 unit/μl	148,000

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상품간략정보 및 구매기능

nTaq-Pure HOT

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제조사	P750P
원산지	500 unit
브랜드	5 unit/μl
판매가격	148,000원
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nTaq-Pure HOT

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제품 설명

nTaq-Pure는 nTaq-HOT (Cat. P725 or P750)을 고순도로 정제한 제품으로 증폭 후에도 E. coli 16S ribosomal RNA 또는 DNA 가 검출되지 않아 E. coli 로 인한 오염이 적습니다.

제품 특징

- Free of E. coli contamination

- Molecular weight: 94 kDa

- Error rate: 2.4 × 10^-5

- Thermal stability: half-life of 40 min at 95℃

- A-tail formation at 3’ ends of amplified DNA

- No activity at temperatures lower than 75℃. Activation by heating up to 95℃.

제품 응용

- Specific amplification of DNA fragments shorter than 3 kb.

- Genomic DNA or cDNA template

- Template DNA with secondary structures that are resistant to PCR amplification

- Suitable for room temperature preparation of PCR reaction mixtures

- Primer extension

- Multiplex PCR

품질 관리

- Purity: >99% on SDS-PAGE

- Endonuclease-free

- Exonuclease-free

- RNase free

- Inhibitor-free

Unit 정의

One unit is defined as the amount of enzyme required to incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble materials in 30 min at 74℃ in a 50-μl reaction mixture (20 mM Tris-HCl/pH 8.8, 50 mM KCl, 2.5 mM MgCl₂, 10 mM β-mercaptoethanol, 12.5 μg of calf thymus DNA).

10X nTaq-HOT buffer

Containing 15 mM MgCl₂

주의 사항

nTaq-Pure HOT requires 10 minutes of initial denaturation to ensure effective activation of the enzyme.

Figure. Genomic DNA contamination test of nTaq-HOT or nTaq-Pure HOT using real-time PCR.

Both nTaq-HOT and nTaq-Pure HOT DNA polymerase showed almost identical PCR efficiency and sensitivity in real-time PCR when E. coli gDNA was used as a template (red and blue line). Without any template DNA, none of amplification signal was detected with nTaq-Pure HOT polymerase in 40 cycle of real-time PCR reaction using E. coli 16S RNA specific primer without any template.

Certificates of analysis

Manual

[ PDF ] P725P_nTaq-Pure HOT_MANUAL

Material Safety Data Sheet

원하지 않는 PCR 산물이 나와요.

비특이적인 PCR 산물이 발생하면 아래 사항을 참조하십시오.
- 비특이 결합을 피하기 위해 더 긴 primer 를 사용하고 3' 말단에서 3개의 연속적인 G 또는 C nucleotides 를 피하세요.
- 특이성을 높이기 위해 annealing 온도를 높이세요.
- Mg²⁺농도를 낮춰서 사용해보세요.
- UDG 를 사용하여 교차 오염을 피하세요. 당사는 UDG가 포함된 PCR 제품들을 제공합니다.
PCR 산물이 너무 적어요

PCR 산물의 양을 늘리려면 아래 사항을 참조하십시오.
- Polymerase 사용량이 부족하거나 또는 PCR 반응액에 저해제가 존재할 수 있습니다.
- Hot-start 제품의 경우 initial denaturation 시간이 충분하지 않으면 PCR 중합효소가 100% 활성화 되지 않을 수 있습니다.
- Denaturation 및 extension 온도가 너무 높아서 polymerase 활성이 조기에 끝날 수 있습니다.
- Pimer가 잘못 설계되었거나 annealing 온도가 잘못 설정되었을 수 있습니다.
- 원하는 산물의 크기에 비해 짧은 extension 시간을 설정했을 수 있습니다.
- PCR cycle이 너무 적을 수 있습니다
- Mg²⁺가 부족하거나 너무 많습니다
- 너무 많은 DMSO가 포함되어 있을 수 있습니다.
PCR 이후 밴드가 보이지 않아요

- Denaturation 이 불완전할 수 있습니다. 높은 온도에서 충분한 시간동안 반응하십시오.
- Annealing 온도가 잘못 설정되었을 수 있습니다. Primer 의 Tm 을 확인하여 적절한 온도를 설정하십시오.
- Template 의 GC 비율이 높을 수 있습니다. 당사의 nTaq-Tenuto, nTaq-HOT, RbTaq Tenuto HOT, RbTaq HOT 에 포함된 GC Melt 를 사용하십시오.
- 반응액에 Taq DNA 중합효소의 저해제가 존재할 수도 있습니다. PCR에 BSA를 추가하거나, Taq의 양을 늘리거나, PCR 반응액의 부피를 늘려 저해제를 희석하십시오.
- GC 함량이 높은 template을 층폭할 경우 DMSO를 첨가해 볼 수 있으나 10% 이상 고농도의 DMSO는 Taq의 반응을 억제할 수 있습니다.
PCR 이후 번짐이 보여요

PCR 이후 전기영동에서 번짐현상은 아래와 같은 이유로 발생할 수 있습니다.
- PCR cycle을 너무 많이 진행했을 수 있습니다.
- 사용 중인 pimer 에 비해 annealing 온도가 낮을 수 있습니다.
- Annealing 또는 extension 시간이 너무 길었을 수 있습니다.
- primer가 오염되거나 오래됐을 수 있습니다.
- 너무 많은 template가 사용되었을 수 있습니다.
- Polymerase, primer, Mg²⁺ 및/또는 dNTP 농도가 너무 높을 수 있습니다.
길이가 긴 타겟을 증폭할 때 중요한 조건은 무엇인가요?

긴 PCR target를 효율적으로 증폭하기 위해서는 annealing 시간, 효소 반응액의 pH, 염 농도, primer design, DNA 샘플의 순도, 효소의 증폭 효율 및 proofreading 여부 등 여러 변수를 고려하여야 합니다.
DNA 정제과정에서 DNA 가 분해되거나 높은 온도와 낮은 pH 조건에서 DNA depurination 등이 일어나 DNA가 손상될 경우, 원래의 길이보다 짧은 DNA 단편의 증폭률이 늘어나며 전체 증폭 산물을 감소시킵니다.
효소의 증폭 효율도 주요한 조건이며, 당사는 긴 타겟의 증폭도 가능한 nTaq-Tenuto, RbTaq-Tenuto Hot, nPfu-Forte, nPfu-Special 등을 제공하고 있습니다.
3-step PCR 과 2-step PCR 의 차이점은 무엇인가요?

1) 3-step PCR
일반적인 PCR이나 짧은 단편 (< 4kb) 증폭 시 주로 사용합니다. 3-step PCR은 denaturation, annealing, extension 과정으로 진행됩니다.
primer의 Tm값이 62℃보다 낮은 경우에는 3 step PCR 을 사용해야 합니다.

2) 2-step PCR
primer 의 Tm 값이 높거나, 증폭 산물이 길 때 (> 4kb) 주로 사용합니다. 2-step PCR은 denaturation 후 annealing & extension이 한 단계로 진행됩니다.
낮은(68℃) extension 온도는 증폭에 영향을 줄 수 있는 depurination 확률을 낮춰 긴 단편의 증폭수율을 개선할 수 있습니다.
㈜엔지노믹스 PCR Polymerase 제품 선택 가이드 라인

Characteristics of Enzynomics PCR polymerases

Selection guide of Enzynomics PCR polymerases

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