EcoO109 I

Product Name Cat. No. Size Conc.
EcoO109 I R085S 2,000 unit 20 unit/μl
EcoO109 I R085M 4,000 unit 20 unit/μl
EcoO109 I R085L 10,000 unit 20 unit/μl
EcoO109 I R085H 10,000 unit 100 unit/μl
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상품간략정보 및 구매기능

EcoO109 I

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제조사 R085H
원산지 10,000 unit
브랜드 100 unit/μl
판매가격 268,000원
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  • EcoO109 I
    +0원

Recognition & cleavage sequence

 


 

SourceE. coli H709c

 

Unit definition

One unit is defined as the amount of enzyme required for complete digestion of 1 μg bacteriophage λ DNA at 37for 1 hr in a 50 μl reaction mixture.

 

Reaction condition

- 1X EzBuffer IV, 37

- 1X FastCut Buffer, 37

 

Thermal inactivation

Temperature

Time

65

20 min

 

Methylation effect

Methylation

dam

dcm

CpG

Cleavage

Cleavage

Conditional

Cleavage

 

Enzyme activity in EzBuffer

I

II

III

IV

FastCut

50%

75%

100%

100%

100%

 

Product component

- EcoO109 I

- 10X EzBuffer IV

- 10X FastCut Buffer

- 6X DNA loading Buffer

- Sterile water

 

Note

EcoO109 I is an isoschizomer of Dra . Activity is inhibited by dcm methylation partially overlapping its recognition. 


 

Figure 1. Unit definition

One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1 µg of Lambda DNA in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 50 µl. 

Certificates of analysis

  • 1. 반응이 완료된 후 정제 과정을 통하여 제한효소를 제거할 수 있습니다.

    2. EDTA (final conc.: 10 mM) 를 추가하여 제한효소의 활성을 억제할 수 있습니다(다음 실험에 영향을 줄 수 있습니다.)

    3. 반응액을 -20 이하에서 냉동 보관하십시오. 

  • ㈜엔지노믹스의 FastCut buffer 는 대부분의 엔지노믹스 제한 효소와 함께 사용할 수 있습니다

    따라서 double digestion 시 FastCut buffer 를 사용하면 쉽게 반응할 수 있습니다. 희석하지 않은 1 ㎕ 의 제한 효소를 FastCut buffer 와 함께 사용하여 15분 내에 1 μ DNA 를 절단할 수 있습니다.

     

    <FastCut buffer 적용 가능 여부>

    Not recommended

    R030

    BstX I

    R056

    Bal I

    R059

    Acc III

    R081

    Cfr9 I

    R099

    PspG I

    CR016

    EZ-CleanCut™ Nhe I

    2X concentrated

    R002

    EcoR I

    R003

    BamH I

    R009

    Sal I

    R108

    BspE I

    1X concentrated

    The rest of Enzynomics’s restriction enzymes

     

    ㈜엔지노믹스의 FastCut Buffer 와 타 브랜드의 효소의 혼합 사용은 권장하지 않습니다 

  • 일부 제한 효소는 부적합한 반응 조건에서 인식 서열과 유사한 서열을 절단하거나 비특이적 반응을 보일 수 있는데, 이를 star activity 라고 합니다. star activity 는 극한 조건에서 발생하는 제한효소의 일반적인 특징이며, 그 조건은 다음과 같습니다.

     

    1. Star activity 가 발생할 수 있는 조건

    다음과 같은 조건에서 star activity 가 발생할 수 있습니다.

    1) 5% (v/v) 이상의 높은 글리세롤 농도

    2) DNA에 비해 높은 비율의 제한효소 사용량 (각 효소에 따라 다름, 일반적으로 100 unit/μg 이상)

    3) 적절하지 않은 반응 Buffer (낮은 이온 농도 또는 높은 pH)

    4) 장시간 반응

    5) 유기 용매의 존재 (DMSO, ethanol, ethylene glycol, dimethylacetamide, dimethylformamide )

    6) Mg2+ 대신 다른 2가 양이온으로 치환 (Mn2+, Cu2+, Co2+, Zn2+)

     

    2. Star activity 억제 방법

    1) 완전한 절단을 위해 가능한 한 적은 양의 제한효소를 사용하십시오. 이를 통해, 과도한 효소 사용을 피하고반응에서 최종 글리세롤 농도를 감소시킬 수 있습니다.

    2) 적절한 반응 buffer를 사용하십시오: 일반적인 제한 효소 반응의 적정 pH 7.2~8.5, ionic strength 50~150 mM 입니다.

    3) 반응 용액에 알코올과 같은 유기 용매가 존재하지 않아야 합니다.

    4) Mg2+ 2가 양이온으로 사용하십시오.

     

    ㈜엔지노믹스는 보다 정확한 실험을 위해 star activity 가 감소된 EZ-CleanCut™ 제한효소를 제공합니다. 

  • ㈜엔지노믹스에서 판매되는 EZ-CleanCut™ 제한효소는 모두 EzBuffer IV 에서 100% 활성을 나타냅니다. 따라서 일반 제한효소와 함께 사용할 수 있습니다.

  • 1. Double digestion 에서 최적의 효소 활성을 보장하면서도 일부 효소의 star activity (비특이반응) 를 감소시기키 위해서는 적합한 buffer 를 선택하는 것이 중요합니다

    각 효소는 최적의 EzBuffer가 제공되며, EzBuffer I~IV 에 따른 효소 활성 정보가 제공됩니다.

     

    2. 각 효소가 최적의 활성을 나타내는 EzBuffer 를 선택하여 반응하시기 바랍니다

    또한, ㈜엔지노믹스는 대부분의 제한효소와 호환되는 단일 버퍼시스템인 FastCut Buffer 를 제공하고 있습니다FastCut Buffer double digestion 반응에 사용할 수 있는 매우 편리한 buffer입니다.

     

    3. 두 제한효소 모두에 대한 최적의 반응 buffer 를 찾기 어려울 경우, 대체 가능한 EZ-CleanCut™ 제한효소가 있는지 검토하십시오

    EZ-CleanCut™ 제한효소는 모두 EzBuffer IV 에서 최적 활성을 나타냅니다.

     

    4. start activity 를 최소화하기 위해서는 글리세롤의 최종 농도가 5% 미만이어야 합니다

    따라서, 50 μl 반응에서 첨가되는 총 효소 양은 5 μl 를 초과하지 않도록 하십시오.

     

    5. 두 제한효소의 권장 반응 온도가 다른 경우, 첫 번째 효소를 첨가하고 권장 온도에서 반응시킨 후 두 번째 효소를 추가하여 권장 온도에서 반응하십시오.

     

    6. 모든 방법에도 불구하고, 함께 반응하기 어려운 경우에는 순차적 반응을 권장합니다

    염 농도가 낮은 EzBuffer 에서 첫번째 제한효소를 반응하고 높은 염 농도의 buffer 를 추가하여 두번째 제한효소 반응을 수행하십시오. 

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