Sac I

Product Name Cat. No. Size Conc.
Sac I R005S 2,000 unit 20 unit/μl
Sac I R005M 4,000 unit 20 unit/μl
Sac I R005L 10,000 unit 20 unit/μl
Sac I R005H 10,000 unit 100 unit/μl
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상품간략정보 및 구매기능

Sac I

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제조사 R005M
원산지 4,000 unit
브랜드 20 unit/μl
판매가격 122,400원
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  • Sac I
    +0원

Recognition & cleavage sequence




SourceStreptomyces achromogenes

 

Unit definition

One unit is defined as the amount of enzyme required for complete digestion of 1-μg bacteriophage λ DNA at 37for 1 hr in a 50-μl reaction mixture.

 

Reaction conditions

- 1X EzBuffer I, 37

- 1X FastCut Buffer, 37

 

Thermal inactivation

Temperature

Time

65

20 min

 

Methylation effect

Methylation

dam

dcm

CpG

Cleavage

Cleavage

Cleavage

Cleavage

 

Enzyme activity in EzBuffer

I

II

III

IV

FastCut

100%

75%

25%

75%

100%

 

Product component

- Sac I

- 10X EzBuffer I

- 10X FastCut Buffer

- 6X DNA loading Buffer

- Sterile water

 

Note

High salt concentrations above 10 mM inhibit enzyme activity. Use clean DNA for efficient cleavage. It is not affected by damdcm, or mammalian CpG methylation. 


 

Figure 1. Unit definition

One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1 µg of Lambda Hind III in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 50 µl. 

Certificates of analysis

  • 1. 반응이 완료된 후 정제 과정을 통하여 제한효소를 제거할 수 있습니다.

    2. EDTA (final conc.: 10 mM) 를 추가하여 제한효소의 활성을 억제할 수 있습니다(다음 실험에 영향을 줄 수 있습니다.)

    3. 반응액을 -20 이하에서 냉동 보관하십시오. 

  • ㈜엔지노믹스의 FastCut buffer 는 대부분의 엔지노믹스 제한 효소와 함께 사용할 수 있습니다

    따라서 double digestion 시 FastCut buffer 를 사용하면 쉽게 반응할 수 있습니다. 희석하지 않은 1 ㎕ 의 제한 효소를 FastCut buffer 와 함께 사용하여 15분 내에 1 μ DNA 를 절단할 수 있습니다.

     

    <FastCut buffer 적용 가능 여부>

    Not recommended

    R030

    BstX I

    R056

    Bal I

    R059

    Acc III

    R081

    Cfr9 I

    R099

    PspG I

    CR016

    EZ-CleanCut™ Nhe I

    2X concentrated

    R002

    EcoR I

    R003

    BamH I

    R009

    Sal I

    R108

    BspE I

    1X concentrated

    The rest of Enzynomics’s restriction enzymes

     

    ㈜엔지노믹스의 FastCut Buffer 와 타 브랜드의 효소의 혼합 사용은 권장하지 않습니다 

  • 일부 제한 효소는 부적합한 반응 조건에서 인식 서열과 유사한 서열을 절단하거나 비특이적 반응을 보일 수 있는데, 이를 star activity 라고 합니다. star activity 는 극한 조건에서 발생하는 제한효소의 일반적인 특징이며, 그 조건은 다음과 같습니다.

     

    1. Star activity 가 발생할 수 있는 조건

    다음과 같은 조건에서 star activity 가 발생할 수 있습니다.

    1) 5% (v/v) 이상의 높은 글리세롤 농도

    2) DNA에 비해 높은 비율의 제한효소 사용량 (각 효소에 따라 다름, 일반적으로 100 unit/μg 이상)

    3) 적절하지 않은 반응 Buffer (낮은 이온 농도 또는 높은 pH)

    4) 장시간 반응

    5) 유기 용매의 존재 (DMSO, ethanol, ethylene glycol, dimethylacetamide, dimethylformamide )

    6) Mg2+ 대신 다른 2가 양이온으로 치환 (Mn2+, Cu2+, Co2+, Zn2+)

     

    2. Star activity 억제 방법

    1) 완전한 절단을 위해 가능한 한 적은 양의 제한효소를 사용하십시오. 이를 통해, 과도한 효소 사용을 피하고반응에서 최종 글리세롤 농도를 감소시킬 수 있습니다.

    2) 적절한 반응 buffer를 사용하십시오: 일반적인 제한 효소 반응의 적정 pH 7.2~8.5, ionic strength 50~150 mM 입니다.

    3) 반응 용액에 알코올과 같은 유기 용매가 존재하지 않아야 합니다.

    4) Mg2+ 2가 양이온으로 사용하십시오.

     

    ㈜엔지노믹스는 보다 정확한 실험을 위해 star activity 가 감소된 EZ-CleanCut™ 제한효소를 제공합니다. 

  • ㈜엔지노믹스에서 판매되는 EZ-CleanCut™ 제한효소는 모두 EzBuffer IV 에서 100% 활성을 나타냅니다. 따라서 일반 제한효소와 함께 사용할 수 있습니다.

  • 1. Double digestion 에서 최적의 효소 활성을 보장하면서도 일부 효소의 star activity (비특이반응) 를 감소시기키 위해서는 적합한 buffer 를 선택하는 것이 중요합니다

    각 효소는 최적의 EzBuffer가 제공되며, EzBuffer I~IV 에 따른 효소 활성 정보가 제공됩니다.

     

    2. 각 효소가 최적의 활성을 나타내는 EzBuffer 를 선택하여 반응하시기 바랍니다

    또한, ㈜엔지노믹스는 대부분의 제한효소와 호환되는 단일 버퍼시스템인 FastCut Buffer 를 제공하고 있습니다FastCut Buffer double digestion 반응에 사용할 수 있는 매우 편리한 buffer입니다.

     

    3. 두 제한효소 모두에 대한 최적의 반응 buffer 를 찾기 어려울 경우, 대체 가능한 EZ-CleanCut™ 제한효소가 있는지 검토하십시오

    EZ-CleanCut™ 제한효소는 모두 EzBuffer IV 에서 최적 활성을 나타냅니다.

     

    4. start activity 를 최소화하기 위해서는 글리세롤의 최종 농도가 5% 미만이어야 합니다

    따라서, 50 μl 반응에서 첨가되는 총 효소 양은 5 μl 를 초과하지 않도록 하십시오.

     

    5. 두 제한효소의 권장 반응 온도가 다른 경우, 첫 번째 효소를 첨가하고 권장 온도에서 반응시킨 후 두 번째 효소를 추가하여 권장 온도에서 반응하십시오.

     

    6. 모든 방법에도 불구하고, 함께 반응하기 어려운 경우에는 순차적 반응을 권장합니다

    염 농도가 낮은 EzBuffer 에서 첫번째 제한효소를 반응하고 높은 염 농도의 buffer 를 추가하여 두번째 제한효소 반응을 수행하십시오. 

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